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Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)

簡要描述:Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液,對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。

  • 產品型號:AP01L076
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-08-06
  • 訪  問  量:1604

詳細介紹

品牌其他品牌CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號AP01L076
規(guī)格100mL供貨周期現(xiàn)貨
主要用途有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。應用領域生物產業(yè)
Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)

產品描述
  Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液,對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。適用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
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產品名稱

貨號

規(guī)格

價格

Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)

AP01L076

100ml

228

產品組分

產品編號產品組成包裝規(guī)格
AP01L076Western/IP細胞裂解液100 mL
磷酸酶抑制劑2*1 mL
PMSF1 mL
產品說明書一份

保存方法
  裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質期一年。
使用方法
1. 對于培養(yǎng)細胞樣品
(1) 融解Western及IP裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂解
對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片;
(2) 融解Western及IP細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(3) 按照每20 mg組織加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。  
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項

1. 用SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定蛋白濃度。

2. 通常6孔板每孔細胞加入100 μL裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
3. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
表1: Western/IP細胞裂解液的使用量參考表

樣品種類樣品來源收獲細胞數RIPA用量可制備樣品數
細胞6孔板2.5*106150-250 μL400-600
60 mm培養(yǎng)板5.2*106300-500 μL200-300
90 mm培養(yǎng)板12.2*106500-1000 μL100-200
25 cm2培養(yǎng)瓶5*106300-500 μL200-300
75 cm2培養(yǎng)瓶2*1071000-2000 μL50-100
組織20 mg組織塊
150-250 μL400-600

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