簡要描述:Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液,對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。
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品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
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分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號 | AP01L076 |
規(guī)格 | 100mL | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。 | 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品描述
Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液,對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。適用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑) | AP01L076 | 100ml | 228 |
產品組分
產品編號 | 產品組成 | 包裝規(guī)格 |
AP01L076 | Western/IP細胞裂解液 | 100 mL |
磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
PMSF | 1 mL | |
產品說明書 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質期一年。
使用方法
1. 對于培養(yǎng)細胞樣品
(1) 融解Western及IP裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂解
對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片;
(2) 融解Western及IP細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(3) 按照每20 mg組織加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項
2. 通常6孔板每孔細胞加入100 μL裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
3. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
表1: Western/IP細胞裂解液的使用量參考表
樣品種類 | 樣品來源 | 收獲細胞數 | RIPA用量 | 可制備樣品數 |
細胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
60 mm培養(yǎng)板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
90 mm培養(yǎng)板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
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