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品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
---|---|---|---|
分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號 | AC12L543/AC12L544 |
規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 采用經典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即 PI stai | 應用領域 | 生物產業(yè) |
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Cell Cycle and Apoptosis Kit (細胞周期檢測試劑盒) | AC12L543 | 50T | 380 |
Cell Cycle and Apoptosis Kit (細胞周期檢測試劑盒) | AC12L544 | 100T | 680 |
產品組分
組分 | 50T | 100T |
A.染色緩沖液 | 25 mL | 50 mL |
B. 碘化丙啶染色液 (20×) | 1.25 mL | 1.25mL*2 |
C. RNase A (50×) | 0.5 mL | 1 m |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存;組分B需避光保存于-20℃。有效期24個月。
使用方法
1.細胞樣品的準備:
對于貼壁細胞:
(1)首先小心收集細胞培養(yǎng)液到離心管內備用。
(2)用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。
(3)再次收集到離心管內,用1000 g 左右離心 3-5 min,沉淀細胞。
注:對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
(4)小心吸除上清,可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS,重懸細胞,并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約 50 μL 左右的 PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
對于懸浮細胞:
(1)用1000 g 左右離心 3-5 min,沉淀細胞。注:對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
(2)小心吸除上清,可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS,重懸細胞,并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約 50 μL 左右的 PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
2.細胞固定:
(1)加入 1 mL 冰浴預冷 75-80%乙醇,輕輕吹打混勻,對于易成團的細胞,要一邊加入乙醇一邊震蕩混勻。如果細胞株本身極易成團,可以先將細胞充分重懸在250 μL 的 PBS 中,一邊逐滴加入 750 μL 的無水乙醇。乙醇終濃度控制在 75%左右即可,PBS 體積及無水乙醇體積可按比例調整。注:切記是先重懸在 PBS 中,不能重懸在培養(yǎng)基中再加無水乙醇!
(2)將 75-80%的乙醇重懸的樣品置于-20ºC,固定過夜。(如著急檢測,-20℃ 固定 1-2 h 也可以進行檢測;乙醇固定的樣品可以在-20℃保存1個月)
(3)1000 g 左右離心 3-5 min, 沉淀細胞。注:對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
(4)小心吸除上清,可以殘留約 50 μL 左右的 75-80%乙醇,以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS,重懸細胞。再次離心沉淀細胞,盡可能將上清去除干凈。
3.碘化丙啶染色液的配制:
參考下表,根據待檢測樣品的數量配制適量的碘化丙啶染色液:
內容 | 一個樣品 | 6 個樣品 | 12 個樣品 |
染色緩沖液 | 0.5 mL | 3 mL | 6 mL |
碘化丙啶染色液(20×) | 25μL | 150 μL | 300 μL |
RNase A (50×) | 10 μL | 60 μL | 120 μL |
終體積 | 0.535 mL | 3.21 mL | 6.42 mL |
【注】:配制好的碘化丙啶染色液短時間內可以 4ºC 保存,宜當日使用。
4.染色:
(1)每管細胞樣品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液, 緩慢并充分重懸細胞沉淀,室溫避光孵育 15-30 min。(2)隨后可以 4ºC 或冰浴避光存放,染色完成后宜在 24 小時內完成流式檢測(建議能在當日完成流式檢測)。
5.流式檢測和分析:
用流式細胞儀在 535 nm 激發(fā)波長, 615 nm 發(fā)射波長的通道檢測紅色熒光,同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事項
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