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SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)

簡(jiǎn)要描述:SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液,通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細(xì)胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。

  • 產(chǎn)品型號(hào):AP01L065
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-08-06
  • 訪  問(wèn)  量:1892

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號(hào)AP01L065
規(guī)格100ml供貨周期現(xiàn)貨
主要用途通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解。應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)
SDS細(xì)胞裂解液 (帶抑制劑)

產(chǎn)品描述
  SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液,通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細(xì)胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。本產(chǎn)品具有有強(qiáng)烈的蛋白變性作用,不能用于非變性蛋白方面的研究。本產(chǎn)品裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation,ChIP)等
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產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)

AP01L065

100 mL

228

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品組成包裝規(guī)格
AP01L065SDS細(xì)胞裂解液100 mL
磷酸酶抑制劑2*1 mL
PMSF1 mL
產(chǎn)品說(shuō)明書一份

保存方法
  裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品

(1) 融解SDS細(xì)胞裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細(xì)胞裂解

對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10 min。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。具體SDS細(xì)胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后,10000~14000rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對(duì)于組織樣品:
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片。
(2) 融解SDS細(xì)胞裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。具體SDS細(xì)胞裂解液的用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。

注意事項(xiàng)

1. 用SDS細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。
2. 通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細(xì)胞至少加入200 μL裂解液。
3. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

表1 :SDS細(xì)胞裂解液的使用量

樣品種類樣品來(lái)源收獲細(xì)胞數(shù)RIPA用量可制備樣品數(shù)
細(xì)胞6孔板2.5*106150-250 μL400-600
60 mm培養(yǎng)板5.2*106300-500 μL200-300
90 mm培養(yǎng)板12.2*106500-1000 μL100-200
25 cm2培養(yǎng)瓶5*106300-500 μL200-300
75 cm2培養(yǎng)瓶2*1071000-2000 μL50-100
組織20 mg組織塊
150-250 μL400-600

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