簡(jiǎn)要描述:SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液,通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細(xì)胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。
相關(guān)文章
Related Articles詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
---|---|---|---|
分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號(hào) | AP01L065 |
規(guī)格 | 100ml | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液,通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細(xì)胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。本產(chǎn)品具有有強(qiáng)烈的蛋白變性作用,不能用于非變性蛋白方面的研究。本產(chǎn)品裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation,ChIP)等。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
SDS細(xì)胞裂解液(帶抑制劑) | AP01L065 | 100 mL | 228 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品組成 | 包裝規(guī)格 |
AP01L065 | SDS細(xì)胞裂解液 | 100 mL |
磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
PMSF | 1 mL | |
產(chǎn)品說(shuō)明書 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品
對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10 min。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。具體SDS細(xì)胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后,10000~14000rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對(duì)于組織樣品:
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片。
(2) 融解SDS細(xì)胞裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。具體SDS細(xì)胞裂解液的用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事項(xiàng)
表1 :SDS細(xì)胞裂解液的使用量
樣品種類 | 樣品來(lái)源 | 收獲細(xì)胞數(shù) | RIPA用量 | 可制備樣品數(shù) |
細(xì)胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
60 mm培養(yǎng)板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
90 mm培養(yǎng)板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
相關(guān)試劑推薦
EZ ECL化學(xué)發(fā)光液(貨號(hào):AP34L024)
BCA蛋白定量試劑盒(貨號(hào):AP12L025)
產(chǎn)品咨詢
電話
微信咨詢
關(guān)注公眾號(hào)