簡要描述:EZ ECL 化學(xué)發(fā)光液(普通型)是一款常規(guī)靈敏度的化學(xué)發(fā)光(ECL)HRP底物,可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn)10pg的蛋白檢測(~1×10-11g),極其節(jié)省抗體。
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品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AP34L044/AP34L045 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
EZ ECL 化學(xué)發(fā)光液(普通型)是一款常規(guī)靈敏度的化學(xué)發(fā)光(ECL)HRP底物,可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn)10pg的蛋白檢測(~1×10-11g),極其節(jié)省抗體。EZ ECL 底物可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和皮克級檢測靈敏度。該底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價比,滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。
EZ ECL 底物的特點:
• 常規(guī)靈敏度:檢測硝化纖維素膜或PVDF膜上10pg的蛋白條帶。。
• 長信號持續(xù)時間:在條件優(yōu)化情況下,經(jīng)底物孵育的印跡條帶能夠持續(xù)輸出 6~8 h 的可檢測光信號。
• 試劑穩(wěn)定:試劑盒在室溫下可穩(wěn)定放置長達(dá)6個月,4℃條件下存放1年不影響使用。
建議稀釋濃度:
• 一抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:1,000-1:5,000 或 0.2-1ug/mL
• 二抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:5,000-1:20,000 或 2.5-10ng
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
EZ ECL 化學(xué)發(fā)光液 (普通型) | AP34L044 | 100mL |
EZ ECL 化學(xué)發(fā)光液 (普通型) | AP34L045 | 500mL |
產(chǎn)品組分
貨號 | 組分 | 規(guī)格 |
AP34L044(100mL) | A液 | 50mL |
B液 | 50mL | |
AP34L045(500mL) | A液 | 250mL |
B液 | 250mL |
運輸與保存
藍(lán)冰運輸。4℃避光干燥保存,有效期12個月。
使用方法
取出印記膜,加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60min,同時振蕩,以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點。
將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1 h,同時振蕩;或在28℃ 孵育過夜,不振蕩。
將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜覆蓋。振蕩孵育≥5 min,更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4~6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號?!咀ⅰ浚孩俜跤?,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。②按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。
將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h,同時振蕩。
重復(fù)步驟3,以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。【注】:膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行洗滌。
將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1 mL工作液,工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h?!咀ⅰ浚罕┞队谌展饣蚱渌麖姽庀驴赡軗p害工作液,為獲得最佳結(jié)果,請將此工作液保存在琥珀色瓶中光;實驗室的常見照明不會損害工作液。
將印記膜在工作液中孵育5 min。從工作液中取出印記膜,并置于一個塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈?!咀ⅰ浚孩倌z片必須在曝光期間保持干燥;②確保將多余的底物從膜和塑料紙上去除;③在整個膠片處理期間,使用手套。
將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光60 s。之后可調(diào)整曝光時間以達(dá)到最佳結(jié)果?;瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5~30 min期間是烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個小時,但強度會隨時間下降,如有底物孵育后較長時間后曝光,曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設(shè)備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機可能需要較長的曝光時間?!咀ⅰ浚耗z片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。
使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進(jìn)行顯影。如果信號太強,則縮短曝光時間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測。
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
為獲得最佳效果,必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分,包括樣品量、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型。該底物極其敏感,自測李記底物正常使用比大多數(shù)他牌底物少得多的樣品、一抗、二抗。
使用本產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測所需的抗體濃度低。為優(yōu)化抗體濃度,請進(jìn)行一次系統(tǒng)的點印跡分析。
沒有一種封閉試劑對所有系統(tǒng)而言都是最佳的,所以為每一個免疫印跡檢測系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng),導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性信號。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性。當(dāng)從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時,有時會出現(xiàn)信號衰減或背景增加的現(xiàn)象,原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng)。
使用親和素/生*素檢測系統(tǒng)時,避免使用牛奶作為封閉試劑,因為牛奶中含有不定量的內(nèi)源性生*素,會導(dǎo)致高背景信號。
保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積,以確保在整個實驗過程中印跡膜被液體覆蓋,避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號。
為獲得最佳效果,在孵育步驟請使用搖床。
將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號。使用高品質(zhì)的產(chǎn)品,如去污劑。它保存在安瓿中,過氧化物和其他雜質(zhì)含量很低。
不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。疊氮鈉是HRP的抑制。
避免手與膜直接接觸,實驗過程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子。
所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來物質(zhì)。金屬器械(如剪刀)不得具有可見的銹跡。銹跡可能導(dǎo)致斑點形成和高背景。
底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強光下可能損害底物,為獲得最佳結(jié)果,將底物工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏在任何強光下,短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。
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