簡要描述:EZ Trans Lipo細胞轉(zhuǎn)染試劑(脂質(zhì)體)為李記生物新研發(fā)的細胞轉(zhuǎn)染試劑,EZ Trans Lipo以納米脂質(zhì)體包裹核酸通過特殊遞送機制,把外源DNA、RNA、siRNA轉(zhuǎn)入各類細胞,能轉(zhuǎn)染貼壁細胞、懸浮細胞,還可用于siRNA和shRNA的基因敲除實驗及基因表達研究。轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性低、適用細胞廣、性價比高等優(yōu)點。
產(chǎn)品分類
Product Category詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
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貨號 | AC04L071 | 規(guī)格 | 1mL |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
EZ Trans Lipo細胞轉(zhuǎn)染試劑(脂質(zhì)體)(以下簡稱“EZ Trans Lipo")為李記生物新研發(fā)的細胞轉(zhuǎn)染試劑,EZ Trans Lipo以納米脂質(zhì)體包裹核酸通過特殊遞送機制,把外源DNA、RNA、siRNA轉(zhuǎn)入各類細胞,能轉(zhuǎn)染貼壁細胞、懸浮細胞,還可用于siRNA和shRNA的基因敲除實驗及基因表達研究。
經(jīng)過對近百種細胞對比測試,EZ Trans Lipo在絕大部分受檢細胞的轉(zhuǎn)染效率、細胞毒性表現(xiàn)均與進口型產(chǎn)品一致或更優(yōu);具備轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性低、適用細胞廣、性價比高等優(yōu)點。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
EZ Trans Lipo細胞轉(zhuǎn)染試劑 (脂質(zhì)體) | AC04L071 | 1 mL | 1300 |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存,有效期12個月。
使用方法
貼壁細胞(以293T細胞、96孔板為例)
1.細胞準備
轉(zhuǎn)染前一天用1酶消化、鋪板,轉(zhuǎn)染當天細胞密度達到3.0x105 個細胞/mL時可進行轉(zhuǎn)染, 細胞匯合度達到70%-80%,保證活細胞>90%。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合物
(1)取兩支無菌EP管(平行樣),兩個EP管各加入5 μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養(yǎng)液,然后每一管各加入EZ Trans Lipo轉(zhuǎn)染試劑0.15 μL,輕微吹吸使混和均勻。
(2)取一支無菌EP管,加入10 μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養(yǎng)液,然后加入待轉(zhuǎn)DNA或質(zhì)粒,確保最終DNA量為0.2 μg,輕微吹吸使混和均勻。
(3)分別吸取將上述含有DNA的培養(yǎng)液5μL加入稀釋好的EZ Trans Lipo的兩個EP管中, 輕輕吹打、晃動使混和均勻,室溫靜置20 min形成DNA-EZ Trans Lipo 復合物(室溫條件4 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定)。
3.轉(zhuǎn)染細胞
把DNA-EZ Trans Lipo 復合物全部加入到96孔板貼壁培養(yǎng)的293細胞中(試劑有重復樣)。逐滴分散加入,輕微晃動。
4.細胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞在 37℃ 培養(yǎng)1-3 d(無需特意更換培養(yǎng)液),根據(jù)實驗設(shè)計實時觀察或收獲細胞檢測。
表1:不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量
培養(yǎng)皿 | 96孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 6cm皿 | 10cm皿 |
推薦鋪板個數(shù)/孔 | 1-3x104 | 0.5-2x105 | 2-3x105 | 0.5-1x106 | 1-2x106 | 2-4x106 |
推薦轉(zhuǎn)染質(zhì)粒總量ug/孔 | 0.1μg | 0.5μg | 1μg | 2μg | 5μg | 10μg |
轉(zhuǎn)染試劑μL/孔 | 0.15μL | 0.75μL | 1.5μL | 3.5μL | 7.5μL | 15μL |
無血清培養(yǎng)基μL | 20μL | 50μL | 100μL | 200μL | 500μL | 1000μL |
懸浮細胞(以293FT細胞、1mL培養(yǎng)體積為例)
1.細胞準備
細胞進行轉(zhuǎn)染當天,細胞密度達到2-2.5x106 個/mL時可進行轉(zhuǎn)染,細胞重懸后匯合度達到70%-80%,保證活細胞>90%。懸浮細胞細胞轉(zhuǎn)染可當天接種/鋪板, 只要細胞狀態(tài)穩(wěn)定即可進行。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合物
(1)取兩支無菌EP管(平行樣),兩個EP管各加入400μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養(yǎng)液, 然每一管各加入EZ Trans Lipo轉(zhuǎn)染試劑15μL,輕微吹吸使混和均勻。
(2)取一支無菌EP管,加入800μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養(yǎng)液,然后加入待轉(zhuǎn)DNA或質(zhì)粒,確保最終DNA量為20μg,輕微吹吸使混和均勻。
(3)分別吸取將上述含有DNA的培養(yǎng)液400μL加入到稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑培養(yǎng)液的兩個EP管中, 輕輕吹打、晃動使混和均勻,室溫靜置20 min(室溫條件4 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定)。
3.轉(zhuǎn)染細胞
把DNA-EZ Trans Lipo復合物800μL全部加入到1 mL懸浮培養(yǎng)的293FT細胞中(有重復樣)。逐滴分散加入,輕微晃動。
4.細胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞,37℃ 懸浮培養(yǎng)細胞1-3 d(無需特意更換培養(yǎng)液),根據(jù)實驗設(shè)計實時觀察或收獲細胞檢測。
注意事項
1.本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的轉(zhuǎn)染過程不要求特意更換,但由于雙抗會影響重組蛋白的表達,為獲得最佳表達效果,建議在細胞轉(zhuǎn)染前2 h更換成不含抗生素和血清的培養(yǎng)基,在轉(zhuǎn)后4-6 h換回含抗生素和血清的培養(yǎng)基。
3.質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度,260nm / 280nm比值確定 DNA 純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
4.細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的特級胎牛血清(Foetal Bovine Serum)(貨號:AC03L055)培養(yǎng)細胞。
5.為了減少操作誤差,上述操作步驟設(shè)定了一個重復平行樣,用戶可根據(jù)實驗室目的和實驗室條件調(diào)整。
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