產(chǎn)品描述

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品能在多種常見細(xì)胞中實現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染效果，且具有操作簡便，重復(fù)性佳等優(yōu)點，適用于 siRNA或miRNA 介導(dǎo)的基因抑制實驗。

訂購信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期 6個月；-30℃至-10℃保存，有效期12個月。注：避免反復(fù)凍融。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1）

1． 接種細(xì)胞

對于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80% 為佳。

對于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細(xì)胞，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為60-80%。

2． 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物）

(1)  對于每孔細(xì)胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

(3)  30 min后，往上述復(fù)合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻。

3． 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1)  細(xì)胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物加入每孔細(xì)胞。

(2)  在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h，無需更換新的培養(yǎng)液，之后即可檢測基因干擾效果或者后續(xù)功能實驗?？稍谵D(zhuǎn)染 12h 后補(bǔ)充 150μL 培養(yǎng)基 (含血清)，總體積達(dá)到 500μL，即達(dá)到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.    小RNA(siRNA/miRNA)質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級RNA。

3.    整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

4.    細(xì)胞條件：細(xì)胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài)，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5.    細(xì)胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基。

6.    由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。

7.   細(xì)胞類型、基因特性、siRNA/miRNA的效力、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素都會影響siRNA/miRNA介導(dǎo)的基因敲低效果。

8.   建議siRNA/miRNA工作濃度在10-100nM之間，轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA/miRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整，請參見表1。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實驗條件進(jìn)行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-RNA復(fù)合物所需培養(yǎng)基的量；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-RNA復(fù)合物的培養(yǎng)基的量。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。