簡要描述:小麥胚芽凝集素,AF555標記(下文簡稱“AF555 WAG"),是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,可能是明亮和紅色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應用廣泛的一類凝集素。
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品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AC15L014 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),綜合 |
產品描述
小麥胚芽凝集素, AF555標記(下文簡稱“AF555 WAG"),是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,可能是明亮和紅色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應用廣泛的一類凝集素。WGA與糖綴合物結合,其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列,即幾丁質酶有關。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結合位點,它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中,只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合,而GalNAc只能弱結合。WGA與含有Galβ(1--4)GlcNAcβ(1--3)重復序列(即聚乳糖胺型聚糖)的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復雜的糖類特異性模式,可用于復雜碳水化合物的結構分析。
技術資料
Ex (nm): | 557 | Em (nm): | 570 |
分子量: | N/A | 溶劑: | Water |
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
小麥胚芽凝集素,AF555標記 | AC15L014 | 1mg |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃避光防潮保存,有效期12個月。
適用儀器
熒光顯微鏡 | |
激發(fā): | Cy3/TRITC濾波片 |
發(fā)射: | Cy3/TRITC濾波片 |
推薦孔板: | 黑色透明 |
使用方法
溶液配制
1. AF555 WAG儲備溶液(200X)配制
將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中,制成 2 mg/mL 的儲備溶液?!咀ⅰ浚褐匦屡渲频膬淙芤嚎稍?4℃ 下短期儲存,或在 -20℃ 下長期儲存。
2. AF555 WAG工作溶液(1X)配制
將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中?!咀ⅰ浚翰煌毎档膬?yōu)化染色濃度可能不同?;罴毎耐扑]起始濃度為 5-10 µg/mL。
操作步驟
1. 活細胞染色
(1) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(2) 添加 100 µL AF555 WAG 工作溶液。
(3) 將細胞與AF555 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
2. 固定細胞染色
(1) 在PBS中使用4%的甲醛固定細胞?!咀ⅰ浚簩τ诠潭毎と旧ㄗh在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區(qū)室染色,如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。
(2) 添加 100 µL AF555 WAG 工作溶液。
(3) 在室溫下用AF555 WAG 工作溶液孵育細胞 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
圖示
圖 1. 使用AF555 WAG 以 5 µg/mL的濃度在活細胞(Hela細胞) 染色 30 min,然后用 Hoechst 33342(Cat# AC12L021)染色。最后使用帶Cy3/TRITC 和 DAPI 濾光片組的熒光顯微鏡成像。
注意事項
1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
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