小麥胚芽凝集素，AF647標(biāo)記

產(chǎn)品描述

小麥胚芽凝集素， AF647標(biāo)記（下文簡稱“AF647 WAG"）， 是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素，可能是明亮和綠色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應(yīng)用廣泛的一類凝集素。由于WGA與糖綴合物結(jié)合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標(biāo)記細(xì)胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。WGA的糖結(jié)合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列，即幾丁質(zhì)酶有關(guān)。每個(gè)單體包含兩個(gè)相同的非相互作用的結(jié)合位點(diǎn)，它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補(bǔ)。在所檢測的單糖中，只有GlcNAc與WGA結(jié)合。甘露聚糖不結(jié)合，而GalNAc只能弱結(jié)合。WGA與含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重復(fù)序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的內(nèi)部GlcNAc殘基具有高親和力結(jié)合。N-乙酰神經(jīng)氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復(fù)雜的糖類特異性模式，可用于復(fù)雜碳水化合物的結(jié)構(gòu)分析。

技術(shù)資料

訂購信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃避光防潮保存，有效期12個(gè)月。

適用儀器

使用方法

溶液配制

1.         AF647 WAG儲(chǔ)備溶液（200X）配制

將 500 µL ddH₂O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。【注】：重新配制的儲(chǔ)備溶液可在 4℃ 下短期儲(chǔ)存，或在 -20℃ 下長期儲(chǔ)存。

2.         AF647 WAG工作溶液（1X）配制

將 5 μL 200X WGA 儲(chǔ)備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中?！咀ⅰ浚翰煌?xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。活細(xì)胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。

操作步驟

1.         活細(xì)胞染色

(1)       用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。

(3)       將細(xì)胞與AF647 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min。

(4)       用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

(5)       使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

2.         固定細(xì)胞染色

(1)       在PBS中使用4％的甲醛固定細(xì)胞?！咀ⅰ浚簩?duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。

(3)       在室溫下用AF647 WAG 工作溶液孵育細(xì)胞 10-30 min。

(4)       用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

(5)       使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

圖示

圖 1. 使用AF647 WAG 以 5 µg/mL的濃度在活細(xì)胞（Hela細(xì)胞） 染色 30 min，然后用 Hoechst 33342（Cat# AC12L021）染色。最后使用帶Cy5和DAPI 濾光片組的熒光顯微鏡成像。

注意事項(xiàng)

1.     本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

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