簡要描述:Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類抗生素,中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散,一般為鹽酸鹽。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類抗生素,中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散,一般為鹽酸鹽。
Blasticidin S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因(常標(biāo)記為bsrr/bsdr/Blastr)質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,具有快速而強(qiáng)效的作用模式,很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細(xì)胞迅速死亡。
本產(chǎn)品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液中,濃度為10mg/ml,經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。本產(chǎn)品10mg和50mg包裝為粉末裝。
Blasticidin S通過干擾核糖體結(jié)合肽段而特異性抑制原核細(xì)胞或真核細(xì)胞的蛋白合成。目前已經(jīng)有3種滅瘟素耐受基因,一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙?;D(zhuǎn)移酶基因bls;另外兩種是脫氨酶基因,分別是從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中分離的bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是zui常用的篩選標(biāo)志,用于哺乳動物和植物細(xì)胞的穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。Blasticidin S也可用于大腸桿菌(E. coli)等原核細(xì)胞的篩選。
Blasticidin S具有快速而強(qiáng)效的作用模式,在很低的抗生素濃度下便能導(dǎo)致細(xì)胞快速死亡。大腸桿菌通常對50μg/ml的濃度敏感,而哺乳動物細(xì)胞對低至2-10µg/ml的濃度敏感。細(xì)胞死亡迅速發(fā)生,通??稍诓坏揭恢艿臅r間內(nèi)即可形成具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定哺乳動物細(xì)胞系。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Blasticidin S HCl (滅瘟素S) | AB11L221 | 10 mg | 940 |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存,有效期36個月。
技術(shù)參數(shù)
1.CAS:3513-03-9
2.分子式:C17H26N8O5·HCl
3.分子量:458.9
4.純度:>95%
5.結(jié)構(gòu)式:
使用方法
1.推薦工作濃度
推薦的作用于哺乳動物細(xì)胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml,但最佳工作濃度需要通過劑量反應(yīng)曲線來確定。
表1.部分常見哺乳動物細(xì)胞的推薦工作濃度表
細(xì)胞名稱 | 細(xì)胞類型 | Blasticidin S濃度 |
A549 | Human lung cancer | 10μg/ml |
CHO | Chinese hamster ovarian | 5-10μg/ml |
HEK293 | Human embryonic kidney | 5-15μg/ml |
HeLa | Human cervical cancer | 2.5-10μg/ml |
HepG2 | Human hepatocellular carcinoma | 4-5μg/ml |
Neuro2a | Mouse neuroblasts | 30μg/ml |
HT1080 | Human fibrosarcoma | 5-20μg/ml |
MCF-7 | Human breast cancer | 2-5μg/ml |
THP-1 | Human monocytes | 10μg/ml |
B16 | Mouse melanoma tumor | 3-10µg/ml |
2.Blasticidin S劑量反應(yīng)曲線的確定
Blasticidin S的有效篩選濃度與細(xì)胞類型、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝及細(xì)胞所處細(xì)胞周期等因素相關(guān)。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定細(xì)胞株,需要確定殺死未轉(zhuǎn)染/感染宿主細(xì)胞所需的Blasticidin S的zui低濃度,可以通過實(shí)驗(yàn)來確定適合自身實(shí)驗(yàn)體系的劑量反應(yīng)曲線(dose-response curve or kill curve)。
(1)第一天:將正常的細(xì)胞按照約25%的密度接種在適宜的細(xì)胞培養(yǎng)板上,于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。
(2)第二天:將培養(yǎng)過夜的細(xì)胞培養(yǎng)基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養(yǎng)基,Blasticidin S濃度可以設(shè)置為0、2、4、6、8和10μg/ml等,每個濃度設(shè)置2個復(fù)孔,于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。注:也可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)體系,設(shè)置不同的濃度梯度。
(3)每3-4 d更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,并觀察存活細(xì)胞的比例。
(4)選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數(shù)細(xì)胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
3.哺乳動物穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選
轉(zhuǎn)染含有bsr或BSD基因的質(zhì)粒或者感染含有該基因的病毒后,即可篩選穩(wěn)定表達(dá)株。
(1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染48h后,將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),此為處理組。
【注】:當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時,抗生素作用zui明顯。細(xì)胞過于密集,抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降,所以細(xì)胞的密度最好不超過25%。建議同時做一個正常細(xì)胞的對照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后,如果細(xì)胞過密也可以消化后重新接種細(xì)胞,培養(yǎng)過夜后即可進(jìn)行Blasticidin S篩選。
(2)每3-4 d去除培養(yǎng)基,加入含Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基。
(3)篩選7-10 d后,對照組正常細(xì)胞應(yīng)該100%死亡,處理組中存活的細(xì)胞為表達(dá)bsr或BSD基因的細(xì)胞。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行多克隆或單克隆細(xì)胞的篩選。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率,集落形成可能需要一周或更多的時間。
(4)克隆形成后,挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)板中,加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7 d。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測。
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域
2.用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),溶解后,須用一次性針頭濾器過濾除菌。
3.抗生素不穩(wěn)定,請?jiān)谟行趦?nèi)盡快使用。
4.以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), 李記生物暫未本產(chǎn)品進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。
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