簡要描述:潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AB11L124 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:AB11L234),Zeocin(Cat:AB11L251)和Blasticidin S(Cat:AB11L221)聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進(jìn)入yin病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
潮霉素B (Hygromycin B) | AB11L124 | 1 g |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存,有效期48個(gè)月。
技術(shù)參數(shù)
1.CAS:31282-04-9
2.溶解性:100mg/ml in Water
3.純度:≥90%
4.酶活/效價(jià):≥950U/mg
5.結(jié)構(gòu)式:
使用方法
1.常用篩選濃度
【注】:潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2.殺滅曲線的建立
【注】:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素zui低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
(1)第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
(2)根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
終濃度(μg/mL) | 培養(yǎng)基體積(ml) | 5mg/ml潮霉素B加入體積(ml) |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
(3)第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
(4)接下來每3-4 d更換新的含藥物培養(yǎng)基。
(5)按照固定的周期(如每2 d)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10 d)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
(3)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
(1)轉(zhuǎn)染48 h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
【注】:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
(2)每隔3-4 d更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
(3)篩選7 d后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
(4)挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7 d。
(5)之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
3.本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請(qǐng)小心操作。
4.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5.以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), 李記生物暫未本產(chǎn)品進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。
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