簡要描述:Collagenase, TypeⅣ 膠原酶Ⅳ型含有低*酶活性,通常用于胰島細(xì)胞的制備,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實驗。膠原酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,既操作簡便又可提高細(xì)胞成活率,終濃度200u/mL,此酶消化作用緩和,無需機(jī)械振蕩。
產(chǎn)品分類
Product Category相關(guān)文章
Related Articles詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC15L343 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 100 mg | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Collagenase, TypeⅣ 膠原酶Ⅳ型 | AC15L343 | 100 mg | 420 |
保存方法
4℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入100 μL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平*鹽溶液,含Ca2+、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1 g/mL(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌,分裝成小份量,然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍,避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為:0.5~2.5 mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1~2 mg/mL,需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的合適的工作濃度。
2.組織的分離
(1)使用無菌shoushu刀或剪刀將組織切成3~4 mm大小的組織塊。
(2)利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次。
(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度。
(4)于37℃孵育4~18 h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
(5)已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育。
(6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次。
(7)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度。
(8)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
3.器官灌注
(1)向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率。
(2)按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液。
(3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來,未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育。
(4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次。
(5)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度。
(6)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
相關(guān)試劑推薦
Collagenase, Type I 膠原酶I型(貨號:AC15L041)
Collagenase, TypeⅡ 膠原酶Ⅱ型(貨號:AC15L141)
Collagenase, TypeⅢ 膠原酶Ⅲ型(貨號:AC15L242)
產(chǎn)品咨詢
電話
微信咨詢
關(guān)注公眾號