品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AP35L144 |
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規(guī)格 | 1mg | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) | | |
iFluor 790琥珀酰亞胺酯
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產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
iFluor 790琥珀酰亞胺酯 | AP35L144 | 1mg | 3200 |
產(chǎn)品描述
iFluor 染料是一系列很棒的熒光標(biāo)記染料,可以覆蓋整個可見光譜。所有iFluor 染料都具有優(yōu)異的水溶性。它們的親水性使有機溶劑的使用極小化。iFluor 染料也具有比經(jīng)典熒光標(biāo)記染料更好的標(biāo)記性能,如FITC,TRITC,Texas Red ,Cy3 ,Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗體上明顯優(yōu)于Alexa Fluor 標(biāo)記染料。它們是用于標(biāo)記蛋白質(zhì)和核酸而不包含性能的極便宜的熒光染料(替代Alexa Fluor 染料)。每種iFluor染料的開發(fā)都與特定的Alexa Fluor 或其他標(biāo)記染料(如DyLight 染料)的光譜特性相匹配。
琥珀酰亞胺基(NHS)酯被證明是用于胺修飾的很棒的試劑,因為形成的酰胺鍵基本上與天然肽鍵相同并且穩(wěn)定。這些試劑通常是穩(wěn)定的并且與脂族胺顯示出良好的反應(yīng)性和選擇性。當(dāng)琥珀酰亞胺酯化合物用于綴合反應(yīng)時,需要考慮的因素很少:1溶劑:在大多數(shù)情況下,活性染料應(yīng)溶于無水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亞砜(DMSO)中。2:反應(yīng)pH:胺與琥珀酰亞胺酯的標(biāo)記反應(yīng)強烈依賴于pH。胺反應(yīng)性試劑與非質(zhì)子化脂族胺基團反應(yīng),包括蛋白質(zhì)的末端胺和賴氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反應(yīng)通常在pH 7.5以上進(jìn)行。通過琥珀酰亞胺酯進(jìn)行的蛋白質(zhì)修飾通常可以在pH 8.5-9.5下進(jìn)行。3:反應(yīng)緩沖液:使用胺反應(yīng)試劑時,必須避免使用含有游離胺(如Tris和gan.an.suan.)和硫醇化合物的緩沖液。廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)也必須在進(jìn)行染料綴合之前除去(例如通過透析)。4:反應(yīng)溫度:大多數(shù)綴合在室溫下進(jìn)行。然而,特定標(biāo)記反應(yīng)可能需要升高或降低的溫度。
技術(shù)資料
1.Ex(nm):786
2.Em(nm):811
3.分子量:1768.30
4.溶劑:DMSO
保存方法
-20℃避光長期保存,保質(zhì)期12個月。
使用方法
1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)儲備溶液(溶液A):
將100μL反應(yīng)緩沖液(如1 M.tan.suan.鈉溶液或1 M磷酸鹽緩沖液,pH~9.0)與900μL目標(biāo)蛋白溶液(如抗體,蛋白質(zhì)濃度> 2 mg / ml,如果可能)混合至100μL給予1 mL蛋白質(zhì)標(biāo)記原液。
【注】:
1:蛋白質(zhì)溶液(溶液A)的pH值應(yīng)為8.5±0.5。如果蛋白質(zhì)溶液的pH低于8.0,則使用1M.tan.suan.氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調(diào)節(jié)至8.0~9.0的范圍。
2:蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2~7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或.gan.an.suan.緩沖液中,則必須用pH7.2~7.4的1X PBS透析,以除去廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。
3:用牛血清白蛋白(BSA)或明膠穩(wěn)定的不純抗體或抗體不能很好地標(biāo)記。 die dan hua na 或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)。可以通過透析或旋轉(zhuǎn)柱除去 die dan hua na 或硫柳汞,以獲得很棒的標(biāo)記結(jié)果。
4:如果蛋白質(zhì)濃度低于2 mg / mL,則結(jié)合效率會顯著降低。為獲得很棒的標(biāo)記效率,建議極終蛋白質(zhì)濃度范圍為2~10 mg / mL。
2.準(zhǔn)備染料儲備溶液(溶液B):
將無水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制備10~20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。
【注】:
在開始綴合前準(zhǔn)備染料儲備溶液(溶液B)。 及時使用。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存兩周,避光保存。 避免凍融循環(huán)。
3.確定合適的染料/蛋白質(zhì)比例(可選):
【注】:
每種蛋白質(zhì)都需要不同的染料/蛋白質(zhì)比例,這也取決于染料的性質(zhì)。蛋白質(zhì)的過度標(biāo)記可能不利地影響其結(jié)合親和力,而低染料/蛋白質(zhì)比率的蛋白質(zhì)綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續(xù)不同量的標(biāo)記染料溶液重復(fù)步驟4和5來實驗確定合適的染料/蛋白質(zhì)比率。通常,對于大多數(shù)染料 - 蛋白質(zhì)綴合物,推薦使用4-6種染料/蛋白質(zhì)。
3.1使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質(zhì))作為起始點:將5 μL染料儲備溶液(溶液B,假設(shè)染料儲備溶液為10 mM)加入到樣品瓶中。蛋白質(zhì)溶液(95μl溶液A)有效搖動。假設(shè)蛋白質(zhì)濃度為10 mg / mL并且蛋白質(zhì)的分子量為200KD,蛋白質(zhì)的濃度為0.05mM。
【注】:
蛋白質(zhì)溶液中DMSO的濃度應(yīng)<10%。
3.2運行綴合反應(yīng)(參見下面的步驟4)。
3.3重復(fù)#3.2,溶液B /溶液A的摩爾比為5:1;分別為15:1和20:1。
3.4使用預(yù)制的旋轉(zhuǎn)柱純化所需的綴合物。
3.5計算上述4種結(jié)合物的染料/蛋白質(zhì)比(DOS)(見說明書)。
3.6運行上述4種結(jié)合物的功能測試,確定合適的染料/蛋白質(zhì)比例,以擴大標(biāo)記反應(yīng)。
4.運行綴合反應(yīng):
4.1有效加入適量的染料儲備溶液(溶液B)到蛋白質(zhì)溶液(溶液A)的小瓶中晃動。
【注】:
溶液B /溶液的合適摩爾比由步驟3.6確定。如果跳過步驟3,我們建議使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白質(zhì))的摩爾比。
4.2繼續(xù)在室溫下旋轉(zhuǎn)或搖動反應(yīng)混合物30~60 min。
5.純化綴合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質(zhì)綴合物的實例。
5.1按照制造說明準(zhǔn)備Sephadex G-25色譜柱。
5.2將反應(yīng)混合物(直接從步驟4)加載到Sephadex G-25柱的頂部。
5.3樣品在頂部樹脂表面下方運行時立即加入PBS(pH 7.2~7.4)。
5.4向所需樣品中加入更多PBS(pH 7.2~7.4)以完成色譜柱純化。合并含有所需染料—蛋白質(zhì)綴合物的級分。
【注】:
1:立即使用時,染料 - 蛋白質(zhì)偶聯(lián)物需要用染色緩沖液稀釋,并等分多次使用。
2:對于長期儲存,染料 - 蛋白質(zhì)綴合物溶液需要濃縮或冷凍干燥
注意事項
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。