簡(jiǎn)要描述:Bradford蛋白定量試劑盒基于考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后, 產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定??赏ㄟ^(guò)檢測(cè)595nm的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量。
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品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AP12L015 |
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規(guī)格 | 500T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 通過(guò)檢測(cè)595nm的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
Bradford 法蛋白定量是基于考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后, 產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在465-595nm處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系,因此可通過(guò)檢測(cè)595nm的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
Bradford蛋白定量試劑盒 | AP12L015 | 500 T | 128 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品組成 | 包裝規(guī)格 |
AP12L015 | Bradford試劑 A | 100 mL |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA) | 1 mL | |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
保存方法
冰袋運(yùn)輸,Bradford試劑A 2-8°C保存,蛋白標(biāo)準(zhǔn)品-20°C保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
方案一、試管檢測(cè)
1、試劑準(zhǔn)備
(1)取適量5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),PBS稀釋至終濃度為2mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。配制后可立即使用,也可以-20°C長(zhǎng)期保存。
(2)稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。
表1:BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表
標(biāo)準(zhǔn)品編號(hào) | 稀釋液體積μl | 標(biāo)準(zhǔn)品用量μl | 標(biāo)準(zhǔn)品濃度μg/ml |
1 | 0 | 100 | 2000 |
2 | 50 | 150 | 1500 |
3 | 200 | 200 | 1000 |
4 | 200 | 200(從3號(hào)管中取) | 500 |
5 | 200 | 200(從4號(hào)管中取) | 250 |
6 | 200 | 200(從5號(hào)管中取) | 125 |
7 | 200 | 0 | 0 |
(3)取干凈的試管,將30μl稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。
(4)取干凈的試管,分別加入30μl待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標(biāo)記,推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。
2、樣品孵育及檢測(cè)
(1)向上一步驟配制的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品BSA和待測(cè)樣品試管中各加入1.5ml Bradford蛋白定量試劑,充分混勻,室溫放置10分鐘。
(2)用分光光度計(jì)測(cè)定595nm 處的吸光值。
3、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算樣品濃度
(1)利用Excel或其他軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
(2)如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
方案二、微孔檢測(cè)
1、試劑準(zhǔn)備
(1)將按表2稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各5μl分別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。
表2:BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表
標(biāo)準(zhǔn)品編號(hào) | 稀釋液體積μl | 標(biāo)準(zhǔn)品用量μl | 標(biāo)準(zhǔn)品濃度μg/ml |
1 | 0 | 20 | 2000 |
2 | 10 | 30 | 1500 |
3 | 40 | 40 | 1000 |
4 | 40 | 40(從3號(hào)管中取) | 500 |
5 | 40 | 40(從4號(hào)管中取) | 250 |
6 | 40 | 40(從5號(hào)管中取) | 125 |
7 | 40 | 0 | 0 |
2、樣品孵育及檢測(cè)
(1)每孔加入250μl Bradford蛋白定量試劑,充分混勻,蓋上96孔板蓋,室溫放置10 分鐘。
(2)用酶標(biāo)儀測(cè)定595nm處的吸光值。
3、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算樣品濃度
(1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
(2)如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
注意事項(xiàng)
1、樣品中若含有去垢劑會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果,請(qǐng)?jiān)囉?BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒;
2、要得到更為準(zhǔn)確的蛋白濃度結(jié)果,每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線;
3、需準(zhǔn)備 37°C水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計(jì),測(cè)定波長(zhǎng)為 465-595nm 之間,595nm合適。酶標(biāo)儀需與 96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),試劑盒測(cè)定的樣品數(shù)量會(huì)因此而減少。使用溫箱孵育時(shí),應(yīng)注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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