產(chǎn)品信息
　　Caspase3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是一類用于檢測(cè)細(xì)胞功能的系列工具，包括細(xì)胞活性、細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞膜電位以及細(xì)胞周期等方面的指標(biāo)。每種檢測(cè)方案均能提供不同熒光顏色的檢測(cè)方案。這些高效的檢測(cè)方案為從多角度研究細(xì)胞功能活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是通過測(cè)量Caspase 3/7的活性而用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)的。因?yàn)镃aspase-3 (CPP32/apopain)在細(xì)胞凋亡的起始過程中發(fā)揮著重要作用，因此其作為一個(gè)值得信賴的細(xì)胞凋亡指示劑廣泛地被大家所接受。Caspase 3具有特異性的底物多肽識(shí)別序列，即天冬氨酸-谷*酸-纈*酸-天冬氨酸(DEVD)。本試劑盒用Z-DEVD-Rh 110-DVED-Z作為Caspase-3活性的熒光指示劑。通過Caspase 3作用，斷裂Rh 110多肽，產(chǎn)生具有強(qiáng)烈綠色熒光的Rh 110，檢測(cè)其在520-530 nm處的熒光強(qiáng)度，其激發(fā)光波長(zhǎng)在340~350nm處。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
　　本試劑盒提供所有必需組分和合適檢測(cè)方案。本檢測(cè)法強(qiáng)大、穩(wěn)定，能夠用于多種熒光研究平臺(tái)的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)。使用時(shí)96孔板時(shí)，每孔用100ul試劑，本試劑盒提供的試劑足夠進(jìn)行200次檢測(cè)；用384微孔板時(shí)，每孔加25ul試劑，本試劑盒提供的試劑足夠進(jìn)行800次檢測(cè)。
技術(shù)資料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
訂購信息

產(chǎn)品組分

實(shí)驗(yàn)方案
1.用測(cè)試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細(xì)胞。
2.加入等體積的Caspase 3/7工作溶液。
3.在室溫下孵育1小時(shí)。
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 515 nm）。
5.將50μLCaspase3/7底物（組分A）加入10mL測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 3/7工作溶液。
操作步驟
1.通過將10μL/孔的10X測(cè)試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測(cè)試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細(xì)胞板在37℃，5％CO2，培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時(shí)間（對(duì)于用喜*堿處理的Jurkat細(xì)胞，4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
3.加100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。
4.將板在室溫下孵育至少1小時(shí)，避光。
【注】：如果需要，在室溫下加入Caspase 3/7工作溶液10分鐘后，將1μL1mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制劑加入到選定的樣品中，以確認(rèn)抑制半胱天冬酶3/7樣活動(dòng)。
5.以800rpm離心細(xì)胞板（特別是對(duì)于非貼壁細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)關(guān)閉）。
6.用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。
數(shù)據(jù)分析
 
圖1. Jurkat細(xì)胞中半胱天冬酶3/7活性的檢測(cè)

　　Jurkat細(xì)胞在同一天以80,000個(gè)細(xì)胞/孔/90μL接種在黑色壁/透明底96孔板中。用或不用20μM喜*堿處理細(xì)胞5小時(shí)，和/或用5μM半胱天冬酶3/7抑制劑AC-DEVD-CHO處理細(xì)胞10分鐘。加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100μL/孔）并在室溫下溫育1小時(shí)。使用NOVOstar儀器（BMG Labtech）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下測(cè)量熒光強(qiáng)度。
注意事項(xiàng)
　　該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。