簡要描述:Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒為Annexin V與PI聯(lián)合使用的試劑盒,用于檢測細(xì)胞凋亡早期的發(fā)生,可區(qū)分凋亡早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。
產(chǎn)品分類
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品牌 | Life-iLab/李記生物 | CAS | / |
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分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號 | AC12L033 |
規(guī)格 | 100T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 區(qū)分凋亡早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒為Annexin V與PI聯(lián)合使用的試劑盒,用于檢測細(xì)胞凋亡早期的發(fā)生,可區(qū)分凋亡早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。
Annexin V為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員,以鈣離子依賴的方式選擇性與磷脂酰絲*酸(PS)結(jié)合。PS正常分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。PS外翻到細(xì)胞膜外是不同類型的細(xì)胞在凋亡早期的明顯特征,用帶有FITC標(biāo)記的Annexin V,即Annexin V-FITC,可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測到這一重要特征。FITC呈現(xiàn)黃綠色熒光。
PI(Propidium Iodide, 碘化丙啶)是一種可對 DNA 染色的細(xì)胞核染色試劑,在嵌入DNA 后釋放紅色熒光。PI不能穿透完整的細(xì)胞膜,但可以穿透壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞。
Annexin V-FITC與PI聯(lián)合使用時,PI 被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時被 FITC 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)。
FITC最大吸收波長和激發(fā)波長分別為494nm和518 nm,PI-DNA復(fù)合物的最大吸收和發(fā)射波長分別為535 nm和617 nm。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 | AC12L033 | 100T |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
Annexin V-FITC | 500 μL |
Propidium iodide | 1 mL |
Binding Buffer(1×) | 100 mL |
運輸與保存
藍(lán)冰運輸。4℃避光保存,有效期18個月。【注】:不可冷凍。
使用方法
下列實驗方案以利用星形孢菌素誘導(dǎo) Jurkat 細(xì)胞凋亡為例,如果使用其他誘導(dǎo)劑和其他類型的細(xì)胞,實驗條件需要略作調(diào)整。
1.流式細(xì)胞檢測
根據(jù)實驗要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,作為陰性對照。此外,建議設(shè)定一組樣品做(Annexin V-FITC或PI)單染,用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
收集細(xì)胞。
懸浮細(xì)胞:300 g,4℃離心 5 min 收集細(xì)胞;
貼壁細(xì)胞:用不含 EDTA 的胰*消化后 300 g,4℃離心 5 min收集細(xì)胞,胰*消化時間不宜過長,以防引起假陽性?!咀ⅰ浚河靡鹊?酶消化然后使細(xì)胞在最佳細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基中恢復(fù)約30 min,然后再染色。胰*白酶消化會暫時破壞質(zhì)膜,允許Annexin V-FITC結(jié)合磷脂酰絲*酸在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面上,從而導(dǎo)致假陽性染色。
用預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞兩次,每次均在 300 g,4℃ 下離心 5 min,收集 1-5×105 個細(xì)胞并用 100 μL 1×結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞。
每管加入 4-5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI工作液?!咀ⅰ浚和扑]準(zhǔn)備兩管額外的流式管,每管只加入一種單染染料(Annexin V-FITC或PI),用于流式單染的補(bǔ)償調(diào)節(jié)。
室溫避光孵育 10-15 min,為避免細(xì)胞凋亡進(jìn)程,孵育過程可在冰上操作。
每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結(jié)合緩沖液,盡快通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。Annexin V-FITC 可以由 488nm 激光激發(fā),檢測熒光發(fā)射光譜約在 530 nm 處(FITC 通道),PI 通道發(fā)射光譜約在 617 nm 處?!咀ⅰ浚篜BS 或 1×結(jié)合緩沖液的選擇根據(jù)不同凋亡處理以及不同細(xì)胞具體選擇。
2.熒光顯微鏡檢測
對于懸浮細(xì)胞,可參照流式細(xì)胞檢測的方法進(jìn)行具體操作。
在蓋玻片或載玻片小室中接種細(xì)胞。
根據(jù)實驗要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,作為陰性對照。
用 PBS 洗滌細(xì)胞?!咀ⅰ浚?/span>細(xì)胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培養(yǎng)基直接替代Annexin V 結(jié)合緩沖液,但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優(yōu)化。
每 100 μL 的 Annexin V 結(jié)合緩沖液中加入 5-25 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI。【注】:最佳使用濃度由具體實驗要求確定。
向培養(yǎng)板中加入足量的染液以覆蓋全部細(xì)胞,室溫避光孵育 15-30 min。為避免細(xì)胞凋亡進(jìn)程,孵育過程可在冰上操作,但孵育時間至少延長至 30 min。
用 1×結(jié)合緩沖液清洗細(xì)胞。
將孵育有細(xì)胞的蓋玻片置于載玻片上,載玻片可提前加一滴 1×結(jié)合緩沖液;對于培養(yǎng)在小室內(nèi)的細(xì)胞,可直接加入足量的 1×結(jié)合緩沖液覆蓋細(xì)胞。
使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。Annexin V-FITC 可用 FITC 適用的濾光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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