產(chǎn)品描述

外泌體（exosome）是由細(xì)胞特異性分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，參與細(xì)胞間的通訊，然而關(guān)于它的分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物"及相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制目前尚不明晰。

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液（尿液等）中的外泌體提取，并搭配純化過(guò)濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒, 可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。

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產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

常溫運(yùn)輸。常溫保存，有效期24個(gè)月?！咀ⅰ浚菏褂们罢?qǐng)充分混勻。

自備材料

1. 高速離心機(jī)（可以達(dá)到10000 g離心力），渦旋振蕩器；50 mL或15 mL離心轉(zhuǎn)子，2 mL離心轉(zhuǎn)子；50 mL或15 mL離心管，5 mL離心管；

2. 1×PBS緩沖液。

使用方法

1. 樣品預(yù)處理

• 取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于25℃水浴中進(jìn)行解凍，將融化后的樣品置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上。

• 樣品初始用量：對(duì)于細(xì)胞上清樣品，單次提取時(shí)的樣品量為20 mL。

• 離心去除細(xì)胞碎片：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃，3000×g離心10 min，取上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。

2. 提取外泌體

• 上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入外泌體濃縮試劑（ECS），加入ECS的量與細(xì)胞上清液的體積比為1: 4.即若細(xì)胞上清液液體積是20 mL,則ESC的量為5 mL。

• 溶液混合：加入ECS試劑后將離心管蓋緊，通過(guò)渦旋振蕩器混勻1 min，再放置于2℃至8℃靜置2 h。

• 沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管，4℃以10000×g離心60 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒?！咀ⅰ浚罕M可能吸凈上清液。

• 外泌體重懸：取100 μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物，待其均勻懸浮在PBS中后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的5 mL離心管中。

• 收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的5 mL離心管，4℃以12000×g離心2 min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒。

3. 純化外泌體

• 純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入外泌體純化濾器（EPF）上室中，4℃，3000×g離心10 min，離心后收集EPF柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒。

• 外泌體的保存：純化后的外泌體以保存于 -80℃ 低溫冰箱中，以備后繼實(shí)驗(yàn)使用。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2. 對(duì)于待測(cè)樣品粘度過(guò)大時(shí)，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。

3. 當(dāng)血清樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí)，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。

4. 針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白（CD 63, CD 9, CD 81等）進(jìn)行Western blot檢測(cè)，可以鑒定所提的外泌體。

5. 多數(shù)情況下，細(xì)胞在體外培養(yǎng)需要血清，但血清中含有外泌體，為了去除血清的外泌體，可以通過(guò)100000×g超速離心過(guò)夜，去除血清外泌體或者可選擇無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

6. 在收獲細(xì)胞時(shí)，應(yīng)確定死亡細(xì)胞占所有細(xì)胞5%以下。細(xì)胞死亡過(guò)程中會(huì)釋放大量大小不等的囊泡，細(xì)胞最終會(huì)裂成碎片，它們?cè)谕饷隗w的純化過(guò)程中會(huì)污染活細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體，影響外泌體的提取。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。