簡要描述:LyGreen HRM專用染料(20×in water)是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實時定量PCR(qPCR)。
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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AN19L021/AN19L022 |
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規(guī)格 | 1ml | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實時定量PCR(qPCR)。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
LyGreen核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實時定量PCR(qPCR)。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體,在沒有DNA存在時,該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu),一旦有DNA出現(xiàn),則恢復(fù)隨機形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強烈的綠色熒光。
與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比,LyGreen具有如下優(yōu)點:(1)靈敏度高:在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號(2)準確:結(jié)合雙鏈DNA,變形時染料不遷移,熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況。過量染料形成二聚體,而不游離,使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I,因此,使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。(3)穩(wěn)定性好:在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復(fù)凍融。(4)安全:細胞膜穿透性測試表明,LyGreen幾乎不能穿透細胞膜。(5)兼容性:和SYBR Green I 光譜相似,使用不同品牌qPCR儀器時不需改變光譜元件設(shè)置,也無需改變操作步驟,qPCR完成后,無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。(6)重復(fù)性好(如圖1):特殊設(shè)計染料,相同反應(yīng)體系下,熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),優(yōu)秀線性。
應(yīng)用實例
圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.
HRM分析設(shè)備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
LyGreen HRM專用染料(20×in water) | AN19L021 | 1 mL |
LyGreen HRM專用染料(20×in water) | AN19L022 | 5*1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。-20 oC干燥避光保存,有效期12個月。
光學(xué)性質(zhì)
激發(fā)波長= 497 nm
發(fā)射波長= 520 nm
使用方法
PCR反應(yīng)的配制(50 μL)
試劑 | 用量 |
ddH2O | 計算加水量,按終體積50 μL |
Taq DNA poLymerase | 5 U |
2mM的 dNTP | 5 μL |
50mM MgCl2 | 2.5 μL |
20 X LyGreen | 2.5 μL |
引物 | 0.1-1 μM(終濃度) |
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
請根據(jù)不同的儀器類型,不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進行適當(dāng)優(yōu)化。
根據(jù)實驗用量于冰上向無菌離心管中依次加入水,Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系(1×Master mix)。
將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中,并加入DNA (50 ng/反應(yīng))。
按照儀器類型選擇合適的擴增程序。
做qPCR時注意設(shè)置陽性和陰性對照。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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