原代細胞凍存液的制備和使用對于細胞的保存和復蘇具有重要意義。以下是制備和使用原代細胞凍存液的步驟:
制備:
準備所需試劑和器材,包括DMSO、FBS、培養(yǎng)基、離心管、移液管、細胞計數(shù)板、顯微鏡等。
收集細胞樣品,加入適量培養(yǎng)基進行洗滌。
棄去培養(yǎng)基,加入適量DMSO和FBS混合液進行細胞凍存液的制備。
將細胞凍存液分裝到凍存管中,每個凍存管中加入1毫升細胞凍存液,標記好凍存管。
將凍存管放入梯度凍存盒中,然后保存至-80℃過夜(如果沒有凍存盒,可以先在4℃冰箱放置30 min,然后轉移至-20℃放置1-2 h,最后轉移至-80℃過夜),第二天取出放入液氮罐,并記錄好位置信息。
使用:
準備所需器材和試劑,包括細胞凍存液、離心管、移液管、培養(yǎng)基等。
從液氮罐中取出凍存管,迅速放入37℃水浴鍋中進行復蘇。
復蘇后,將細胞轉移至培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
保存:
在復蘇后數(shù)小時內(nèi)將細胞傳代并培養(yǎng),以便快速擴增和存儲。
可以將細胞保存在常規(guī)培養(yǎng)箱中,但需要注意溫度和濕度的控制。
可以使用細胞凍存盒將細胞保存于-80℃冰箱中,以延長細胞的存活時間。