介紹幾種常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法
更新時間:2022-09-28 點(diǎn)擊次數(shù):1259
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類:化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)的,即沒有任何方法適用于所有細(xì)胞和所有實(shí)驗(yàn)。因而只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
下面介紹幾種常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法:
1、DEAE-右旋糖苷法
常言道:同性相斥,異性相吸。因而,當(dāng)帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負(fù)電的磷酸骨架相遇,妥妥的火花四射,而后會被細(xì)胞膜抱團(tuán)相擁并通過細(xì)胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉(zhuǎn)染,操作相對簡單、結(jié)果可重復(fù),但是對細(xì)胞有一定的毒副作用,且轉(zhuǎn)染時需要血清。
2、磷酸鈣法
通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀,可使共沉淀中濃縮DNA分子與細(xì)胞表面結(jié)合并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異,且對許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性,轉(zhuǎn)染效率較差。
3、人工脂質(zhì)體法
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物,進(jìn)而可被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好,但轉(zhuǎn)染時需要去除血清,轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。
4、電穿孔法
有時,細(xì)胞有些“油鹽不進(jìn)”,就是不開放門戶給核酸放行,此時各位小伙伴可采用一些強(qiáng)硬手段—電穿孔法。此法利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,使得DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定/瞬時性轉(zhuǎn)染,適用于所有類型的細(xì)胞,但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大,且需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。
其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊,可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細(xì)胞內(nèi),適用于瞬時性轉(zhuǎn)染。該技術(shù)可需要昂貴的設(shè)備,且細(xì)胞死亡率較高。而后者則是通過精細(xì)的注射針將核酸送入胞漿中,一次只能輸送一個細(xì)胞中,適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物或輸送人工染色體。