選擇真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑要考慮哪些因素
更新時(shí)間:2022-08-30 點(diǎn)擊次數(shù):769
轉(zhuǎn)染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導(dǎo)入細(xì)胞的過(guò)程。采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入外源性核酸會(huì)改變細(xì)胞的特性,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究。轉(zhuǎn)染后,導(dǎo)入的核酸可以瞬時(shí)性地存在于細(xì)胞內(nèi),只表達(dá)一段時(shí)間且不會(huì)復(fù)制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內(nèi),隨著宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術(shù)語(yǔ)與該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展步調(diào)一致,并進(jìn)一步區(qū)分不同的方法和細(xì)胞類(lèi)型。
轉(zhuǎn)染技術(shù)作為一種分析工具,可將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞,有助于機(jī)體表征遺傳、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育等功能的研究。慢病毒載體,腺病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等病毒傳遞系統(tǒng)可用于轉(zhuǎn)運(yùn)DNA或RNA到目的細(xì)胞中。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)整合效率高,但存在一定的生物安全隱患,且轉(zhuǎn)染的準(zhǔn)備程序比較復(fù)雜,對(duì)細(xì)胞類(lèi)型有很強(qiáng)的選擇性。此外,在進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)染之前,需要考慮幾種限制因素,如病毒載體的裂解性質(zhì),細(xì)胞系包裝和宿主細(xì)胞特異性等。
理想的核酸轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該是高效、安全、簡(jiǎn)單、省時(shí)和經(jīng)濟(jì)的。隨著轉(zhuǎn)染方法的不斷發(fā)展以及轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)日益增加,選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑以達(dá)到轉(zhuǎn)染效率顯得尤為重要。在考慮合適的
真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑時(shí),應(yīng)首先確定測(cè)定的細(xì)胞類(lèi)型和培養(yǎng)條件。罕見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng),如神經(jīng)元和原代細(xì)胞等通常難以轉(zhuǎn)染,因此可能需要能促進(jìn)轉(zhuǎn)染的試劑。此外,在選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑之前,還應(yīng)該考慮試劑水平和細(xì)胞毒性參數(shù)。