細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。定義 隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。
下文中將從多個維度,介紹細胞轉(zhuǎn)染的各類小知識。
哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾,表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài),便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境,進行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞,表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式:瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(構建穩(wěn)定細胞系),如圖1.所示。
瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有如下特點:
瞬時轉(zhuǎn)染 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 | |
基因融合 | 游離存在于染色體外(episome) | 整合于細胞染色體上 |
表達快慢 | 24-72小時內(nèi)可獲得表達產(chǎn)物 | 數(shù)天,需經(jīng)過基因融合、培養(yǎng)、篩選 |
待轉(zhuǎn)基因 | 不需要線性化,超螺旋結(jié)構更容易轉(zhuǎn)染和表達 | 需要線性化,便于整合到宿主細胞 |
抗性選擇 | 待轉(zhuǎn)質(zhì)?;虿恍鑾Э剐?/span> | 待轉(zhuǎn)基因必須帶有抗性,便于篩選克隆 |
成本 | 實驗室成本低 | 實驗室成本高,得到穩(wěn)定株后表達成本低 |
用途 | 蛋?質(zhì)的?規(guī)模合成 | 蛋?質(zhì)?規(guī)模合成,遺傳調(diào)控機制研究,長期藥理學研究 |
細胞轉(zhuǎn)染方法可分為化學法,物理法,生物法,也可把化學法、物理法稱為非病毒載體,生物法稱為病毒載體。不同的轉(zhuǎn)染方法可分別用于瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,不過效率與效果不同。
病毒介導轉(zhuǎn)染是目前在細胞治療等應用中有前景的方向,化學法,物理法在實施過程中,對細胞均有一定程度的損害,所以用于細胞治療藥物的研究受到限制。病毒介導轉(zhuǎn)染也叫侵染。人類有漫長的和病毒斗爭的歷史,對病毒研究較為清晰,改造后病毒轉(zhuǎn)染結(jié)果相對可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經(jīng)有多個上市,比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送,一針200萬美元,已上市3個CART用慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒(HIV的變種)來轉(zhuǎn)入基因,已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等。
病毒載體的制備是目前CRO服務中的重要內(nèi)容,病毒載體的生產(chǎn)(如圖)先用大腸桿菌等生產(chǎn)出質(zhì)粒,然后把多種質(zhì)粒(通常是三質(zhì)粒或四質(zhì)粒系統(tǒng))通過轉(zhuǎn)染進入細胞中,表達出病毒載體的外殼蛋白、功能蛋白等,然后組裝成含目的基因的病毒載體,通過純化工藝獲得工具病毒,工具病毒感染細胞,腺病毒可于轉(zhuǎn)染成功2小時后即可檢測到表達產(chǎn)物,逆轉(zhuǎn)錄病毒則需要經(jīng)過多輪賽選,選擇基因整合進細胞基因組的穩(wěn)定細胞株,用于后續(xù)研究。
Ps:李記生物EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑可用于各類病毒包裝。
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