DNA定量試劑盒的檢測(cè)規(guī)程
更新時(shí)間:2017-07-04 點(diǎn)擊次數(shù):1323
DNA定量試劑盒結(jié)果判斷,如果Ct值=40,則實(shí)驗(yàn)樣品的UU DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)<1×103。如果Ct值<40,則實(shí)驗(yàn)樣品的UU DNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)= M。檢測(cè)樣本中核酸陽(yáng)性時(shí),按實(shí)際結(jié)果報(bào)告;對(duì)可疑結(jié)果應(yīng)復(fù)查,需要時(shí)與臨床。注意事項(xiàng),各標(biāo)本沸水浴時(shí)間誤差不超過(guò)1分鐘。加樣時(shí)每加完一個(gè)要立即蓋上封閉好離心管。
DNA定量試劑盒操作時(shí),須戴手套。使用新鮮配制的 染色工作液,務(wù)必不要超過(guò) 2 小時(shí),且注意避光。建議使用塑料管配制 染色工作液,而不是玻璃制品。孵育時(shí),避免光照。系統(tǒng)檢測(cè),標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定 1 次即可;如果儀器更換,則需要重新測(cè)定 1 次。如果熒光讀數(shù)過(guò)高,可以相應(yīng)稀釋樣品量。可以使用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè),試劑用量和體系均除以 5,包括標(biāo)準(zhǔn) DNA 含量,其計(jì)算公式[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA 濃度(微克)X樣品稀釋倍數(shù)]÷0.1(樣品容量;毫升)=微克/毫升。鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA 和 RNA 不會(huì)干擾檢測(cè)。
DNA定量試劑盒關(guān)閉擴(kuò)增儀蓋,按儀器操作規(guī)程開始循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)束后關(guān)閉擴(kuò)增儀電源,取出PCR反應(yīng)管,密封放入垃圾桶。產(chǎn)物分析,條件設(shè)置:反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件,調(diào)整熒光數(shù)值為F1/F2。點(diǎn)擊Quantification讀取結(jié)果。基線的確定:取3~8個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)。