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培養(yǎng)細(xì)胞如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的血清?快點(diǎn)擊進(jìn)來(lái)看看吧!

更新時(shí)間:2017-02-22      點(diǎn)擊次數(shù):3419

培養(yǎng)細(xì)胞如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的血清?快點(diǎn)擊進(jìn)來(lái)看看吧!

血清(Serum)即血液凝固析出的淡黃色透明液體

    將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。在凝血過(guò)程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,血清中無(wú)纖維蛋白原,這一點(diǎn)是與血漿zui大的區(qū)別。在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學(xué)成分的分析,都以血清為樣品。 

血漿(Plasma)相當(dāng)于結(jié)締組織的細(xì)胞間質(zhì),是血液的重要組成部分,呈淡黃色液體(因含有膽紅素)
    在血漿的化學(xué)成分中,水分占90~92%,溶質(zhì)以血漿蛋白為主。血漿蛋白是多種蛋白質(zhì)的總稱(chēng),用鹽析法可將其分為白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原三類(lèi)。

    血漿蛋白質(zhì)的功能有:維持血漿膠體滲透壓;組成血液緩沖體系,參與維持血液酸堿平衡;運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)和代謝物質(zhì),血漿蛋白質(zhì)為親水膠體,許多難溶于水的物質(zhì)與其結(jié)合變?yōu)橐兹苡谒奈镔|(zhì);營(yíng)養(yǎng)功能,血漿蛋白分解產(chǎn)生的氨基酸,可用于合成組織蛋白質(zhì)或氧化分解供應(yīng)能量;參與凝血和免疫作用。

天然培養(yǎng)基

   培養(yǎng)基的主要成份中動(dòng)物血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用.在動(dòng)物血清的應(yīng)用中牛血清又是的,所以血清是醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品中重要的原材料之一。保證血清質(zhì)量也是促進(jìn)生物制品質(zhì)量提高的重要環(huán)節(jié)。

血 清 種 類(lèi)

    目前用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)zui高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分zui少。

血清的主要成分

    血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展,但仍存在一些問(wèn)題。主要是:

*:血清的成份可能有幾百種之多,目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類(lèi)生長(zhǎng)因子、激素和脂類(lèi)等尚未充分認(rèn)識(shí),這給研究工作帶來(lái)許多困難。

第二:血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難。從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。

第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認(rèn)為是“瓶中惡化”的原因之一。

血清的主要作用

    提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì);

    提供激素和各種生長(zhǎng)因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素、類(lèi)固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)等.生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等;

    提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵.結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用;

    提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷; 對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用:有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí),粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們?cè)诖x解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。

使用血清的缺點(diǎn)

    血清成分復(fù)雜,雖含許多對(duì)細(xì)胞有利成分,也含有對(duì)細(xì)胞有害的成分,使血清有幾個(gè)明顯的缺點(diǎn):

*、對(duì)大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)(成纖維細(xì)胞)同時(shí)抑制另一類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)(表皮細(xì)胞);

第二、血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡;動(dòng)物個(gè)體不同,血清產(chǎn)地、批號(hào)不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致;

第三、取材中可能帶入支原體、病毒,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性;血清的使用使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難,其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成;

第四、 大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來(lái)源越來(lái)越困難,價(jià)格昂貴,是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。

    盡管在細(xì)胞培養(yǎng)中存在一些不確定的因素,但血清仍然是細(xì)胞培養(yǎng)液中zui基本的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良時(shí),常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛后再換成無(wú)血清培養(yǎng)液。

相信品牌,但不能迷信品牌 

    Hyclone, Gibico, Biowest, Life-iLab, BI, Gemini等品牌血源均為國(guó)外(澳洲或南美)用戶(hù)相對(duì)較多,可信度較高。但由于血清產(chǎn)品的特殊性,批次間差異較大,同一品牌不同批次的選擇非常重要。有經(jīng)驗(yàn)的用戶(hù),往往對(duì)批次好的產(chǎn)品大量采購(gòu)備用。Gibico, Hyclone等產(chǎn)量zui大,覆蓋范圍zui廣。Life-iLab胎牛血清在批次的控制方面做得,穩(wěn)定性好,在工業(yè)客戶(hù)中使用量較高。

驗(yàn)證

    沒(méi)有一種血清可以滿(mǎn)足所有細(xì)胞生長(zhǎng)所需,在換血清品牌,或者同一品牌換批次時(shí)都要做好驗(yàn)證工作,相對(duì)來(lái)講批次間差距越小越好,不為品牌,不為價(jià)格,只買(mǎi)對(duì)的。

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